随着乳腺癌HER2三分类新时代的到来，HER2精准检测的重要性日益显著。而病理学家对HER2 IHC评分的判读具有主观性，当前亟需一种标准化的方法来确保HER2判读的准确性和一致性。一项研究致力于评估病理学家在HER2 IHC评分上的一致性，并探讨数字图像分析（DIA）在辅助HER2低表达乳腺癌HER2 IHC判读准确性方面的作用。研究结果显示，尽管病理学家在评估HER2 IHC得分为0和1+的乳腺癌病例时表现出较高一致性，但DIA有望成为提升HER2 IHC评估标准化与量化水平的可靠辅助手段，特别是在面临结果可能模糊不清的复杂病例（即得分为0-1+）时。这些发现为提升HER2检测的准确性和一致性提供了新的契机。
本研究检索了2022年2月至8月期间，在本机构接受乳腺粗针穿刺活检并诊断为浸润性乳腺癌且HER2状态呈阴性的病例，共计纳入50例受试者。其中，HER2 IHC评分为0的受试者共25例，评分为1+的受试者共25例。所有活检样本均严格按照ASCO-CAP指南所制定的标本采集与固定时间进行处理。HER2 IHC染色采用4B5 HER2/neu抗体以及Ventana BenchMark Ultra自动免疫染色系统。
在研究过程中，六位乳腺病理学家对数字化扫描的全切片图像进行了独立评估，并给出HER2 IHC评分。初步评分完成后，在第二轮评分中，所有病理学家针对少于6位病理学家达成一致的病例进行线上讨论，以使最终评分达成共识。
本研究采用了Aperio的膜算法v9.1，针对同一队列的数字化扫描全切片图像进行HER2 IHC染色评分。该算法能够自动选定肿瘤区域，并量化单个肿瘤细胞的膜染色强度及完整性。DIA得分则根据细胞分类比例进行确定。如果>10%的细胞显示3+染色，则评估DIA 3+得分；如果>10%的细胞显示2+或更高染色，则分配DIA 2+得分；如果>10%的细胞显示1+或更高染色，则评估DIA 1+得分；如果<10%的细胞显示1+或更高染色，则分配DIA 0得分。
在统计分析方面，使用SPSS统计软件中的Kendall一致性系数（W）统计测试评估病理学家之间的观察者一致性以及病理学家评分与DIA结果之间的一致性。W值指示一致性水平：0.80-1.00表示极高的一致性；0.60-0.79，良好一致性；0.40-0.59，中等一致性；0.20-0.39，轻微一致性；0.00-0.19，较差一致性。
HER2 IHC评分的观察者间可重复性
在初步评分中，六位病理学家共评估了50个病例，其中25个病例原HER2 IHC得分为0，另外25个病例为1+。在得分为0的25个病例中，133个评分（88.7%）保持为0，17个评分（11.3%）变更为1+。在得分为1+的25个病例中，113个评分（75.3%）保持为1+，12个评分（8%）变更为0，25个评分（16.7%）提升至2+。
六位病理学家完全一致的评分出现在19个病例中（19/50，38%），包括17个原得分为0的病例（17/25，68%）和2个原得分为1+的病例（2/25，8%）。至少五位病理学家达成一致的评分出现在33个病例中（33/50，66%），包括18个原得分为0的病例（18/25，72%）和15个原得分为1+的病例（15/25，60%）。病理学家间整体一致性的Kendall W值为0.828，表明有极高的一致性。在第二轮评分中，对7个得分为0的病例和10个得分为1+的病例进行了重新评估，最终达成共识。
图1. 50例浸润性乳腺癌HER2免疫组织化学评分
病理学家评分与DIA结果之间的一致性
在本研究中，HER2初步评分结果显示，在50个病例中，有19个病例（38%）获得了全部6位病理学家的完全一致评分（6/6）。同时，在33个病例（66%）中，至少有5位或以上的病理学家（≥5/6）达成了一致评分，这些一致率相较于之前的研究报告有所提升。
本研究中所有观察者均为专注于乳腺亚专科的病理学家，且均明确知晓本研究旨在明确IHC得分为0或1+的HER2阴性乳腺癌的情况，因此在每个病例中，评分标准得到了更为严格的应用。具体而言，在最初IHC得分为0的25个病例中，有68%（即17个病例）获得了全部6位病理学家的完全一致评分，而有72%（即18个病例）获得了至少5位病理学家的一致评分。相比之下，在最初得分为1+的25个病例中，仅有8%（即2个病例）获得了全部6位病理学家的完全一致评分，而有60%（即15个病例）获得了至少5位病理学家的一致评分。
对于IHC评分为1+的病例，评分的不一致性主要源于肿瘤细胞染色百分比（≤10%与>10%）和染色强度（微弱或几乎不可见与弱至中等染色）的主观判断。在本研究的六位乳腺病理学家中，有一位病理学家倾向于给出比其他病理学家更高的评分，这进一步体现了人工评分系统所具有的主观性。
值得注意的是，常用的HER2 IHC检测并非为定量检测蛋白表达水平而开发。鉴于这一局限性，目前正积极研究新技术，如定量免疫荧光测定法和免疫亲和富集结合多重反应监测-质谱（MRM），以期对HER2低表达乳腺癌提供更全面和准确的评估。尽管这些技术显示出潜力，但其在临床中的有效性仍需进一步验证。目前，ASCO-CAP指南尚未建议改变HER2检测算法。此外，基于DIA和人工智能的方法也被评估用于HER2 IHC辅助评分，并显示出与病理学家评分的较高一致性。本研究的局限性在于病例数量有限，且仅包括HER2 IHC得分为0或1+的病例。未来需要更多研究来验证DIA算法在更广泛HER2 IHC评分中的应用前景。
参考文献：
1.Sun H, Kang EY, Chen H, et al. Immunohistochemical assessment of HER2 low breast cancer: interobserver reproducibility and correlation with digital image analysis. Breast Cancer Res Treat. 2024 Jun;205(2):403-411.
审批编号：CN-155248 有效期至：2026-03-09
本材料由阿斯利康提供，仅供医疗卫生专业人士参考
*“医学界”力求所发表内容专业、可靠，但不对内容的准确性做出承诺；请相关各方在采用或以此作为决策依据时另行核查。
